制限酵素についてすべて

制限酵素についてどれだけ知っていますか？このレビューでは、彼らが何をしているのか、なぜ重要であるのかをよりよく理解することができます。

制限酵素の定義制限エンドヌクレアーゼは、DNA分子を切断する一種の酵素である。各酵素は、DNA鎖中のヌクレオチドのユニークな配列を認識する。そのような配列は、通常、約4〜6塩基対の長さである。相補的なDNA鎖が逆方向のみで同じ配列を有する点で配列は回文的である。

<！すなわち、DNAの両方の鎖が同じ位置で切断される。これらの酵素が発見された場合

制限酵素は、それらの生物学的役割が細胞防御に関与する細菌の多くの異なる菌株に見出される。これらの酵素は、細胞に侵入する外来性（例えば、ウイルス性）DNAを破壊することにより「制限」する。宿主細胞は、それぞれの制限酵素に特異的な部位でそれ自身のDNAをメチル化し、それによってそれを切断から保護する制限 - 修飾システムを有する。 100以上の異なるヌクレオチド配列を認識する800種以上の既知の酵素が発見されている。

<！バイオテクノロジーでの使用

制限酵素は、個体間の断片長差（制限断片長ポリモフィズム-RFLP）を研究するために、DNAをより小さな鎖に切断するためにバイオテクノロジーで使用されている。遺伝子クローニングにも使用されています。個体または個体群が、ゲノムの特定の領域における遺伝子配列および制限切断パターンに顕著な相違を有することを決定するために、RFLP技術が用いられてきた。

これらのユニークな領域の知識は、DNAフィンガープリンティングの基礎です。これらの方法の各々は、DNA断片の分離のためのアガロースゲル電気泳動の使用に依存する。トリス塩基、ホウ酸、およびEDTAからなるTBE緩衝液は、アガロースゲル電気泳動でDNA産物を調べるために一般的に使用されます。

制限酵素の種類制限酵素には3つの異なる種類がある。タイプIは、認識部位から1000塩基以上離れたランダムな位置にDNAを切断する。タイプIIIは、サイトから約25塩基対で切断する。タイプIおよびタイプIIIはATPを必要とし、複数のサブユニットを有する大きな酵素であり得る。バイオテクノロジーで主に使用されているタイプII酵素は、ATPを必要とせずに認識された配列内のDNAを切断し、より小さく、より単純である。タイプII制限酵素は、それらが単離される細菌種にしたがって命名される。例えば、酵素EcoRIをE.coliから単離した。 coli

。一般市民のほとんどは、

Eに精通しています。大腸菌

が食物中に流行した。タイプII制限酵素は、認識配列の中央で両方の鎖を切断するか、認識配列の一端に近い各鎖を切断するかによって、2つの異なるタイプの切断を生成することができる。前者のカットは、ヌクレオチドオーバーハングのない「平滑末端」を生成する。 DNAの各断片は、他の断片を補完するオーバーハングを有するため、後者は「粘着性」または「凝集性」の末端を生成する。両方とも、組換えDNAおよびタンパク質を作製する分子遺伝学において有用である。この形態のDNAは、もともと一緒に連結されていない2つ以上の異なる鎖のライゲーション（一緒に結合すること）によって産生されるため、際立っている。